Phản ứng bất lợi với mỹ phẩm và các phương pháp thử nghiệm

 Phản ứng không mong muốn đối với mỹ phẩm, đồ dùng vệ sinh vàsử dụng thuốc là thường khiến người taphải đến bệnh viện vì viêm da tiếp xúc dị ứng. Trong hầu hết các trường hợp, chỉ là nhẹ hoặc thoáng qua và hầu hết các phản ứng là kích thích hơn là dị ứng theo tự nhiên. Các tác dụng phụ khác nhau có thể xảy ra ở dạng độc cấp tính, hấp thụ qua da, kích ứng da, kích ứng mắt, mẫn cảm và nhạy cảm với da, nhiễm độc cận lâm sàng, gây đột biến/nhiễm độc gen và quang độc tính/quang hóa.

Đánh giá sự an toàn của một sản phẩm mỹ phẩm rõ ràng phụ thuộc vào cách sử dụng, vì nó xác định lượng chất có thể ăn, hít hoặc hấp thụ qua da hoặc màng nhầy. Nồng độ của các thành phần được sử dụng trong các sản phẩm khác nhau cũng rất quan trọng. Các quy trình thử nghiệm khác nhau bao gồm mô hình động vật in vivo và mô hình in vitro. Chẳng hạn như thử nghiệm vá mở hoặc đóng, thử nghiệm kích ứng da in vivo, thử nghiệm khả năng ăn mòn da (thử nghiệm kháng điện qua da chuột, thử nghiệm Episkin), thử nghiệm kích ứng mắt (thử nghiệm kích thích mắt in vivo và thử nghiệm kích thích mắt Draize), xét nghiệm gây đột biến/nhiễm độc gen (xét nghiệm đột biến ngược vi khuẩn in vitro và xét nghiệm quang sai nhiễm sắc thể tế bào động vật có vú) và xét nghiệm quang độc tính/quang hóa (xét nghiệm độc tính quang hóa 3T3). Các sản phẩm mỹ phẩm thành phẩm thường được thử nghiệm trong các quần thể nhỏ để xác định tính tương thích của da và màng nhầy, nhằm đánh giá khả năng chấp nhận mỹ phẩm đó.

Giới thiệu

Mỹ phẩm là các hạt được dự định để thoa, rửa, rắc hoặc phun, đưa vào hoặc áp dụng cho cơ thể người hoặc bất kỳ phần nào của cơ thể để làm sạch, làm đẹp, tăng cường sự hấp dẫn hoặc thay đổi diện mạo. Người ta thấy rằng hàng ngày một người trưởng thành trung bình sử dụng chín sản phẩm mỹ phẩm. Hơn 25% phụ nữ sử dụng 15 sản phẩm mỹ phẩm hoặc nhiều hơn. Mỹ phẩm, đồ dùng vệ sinh và các sản phẩm chăm sóc da, bao gồm cả kem chống nắng, thường xuyên gây ra phản ứng bất lợi và là lý do thông thường nhất để đến bệnh viện do viêm da tiếp xúc dị ứng.

Người ta ước tính, 13% dân số bị dị ứng với một thành phần mỹ phẩm hoặc mỹ phẩm. Trong một cuộc khảo sát của Mỹ bao gồm 30.000 người tiêu dùng, 700 ca phản ứng đã xảy ra trong thời gian 1 năm.

Từ quan điểm của bác sĩ da liễu, mỹ phẩm có thể được nhóm lại thành: (a) mỹ phẩm chăm sóc da (chất làm sạch, chất giữ ẩm, vv.), (b) mỹ phẩm chăm sóc tóc (dầu gội, thuốc nhuộm tóc, chất tạo kiểu, vv.) , (c) mỹ phẩm chăm sóc da mặt (phấn nền, phấn phủ, phấn mắt, mascara, son môi, vv.), (d) mỹ phẩm chăm sóc móng (sơn móng tay, tẩy sơn móng tay, vv.), (e) sản phẩm nước hoa (chất khử mùi,  nước hoa, vv.) và (f) các chế phẩm sàng lọc ánh sáng cực tím (UV). Các chất làm sạch da vẫn còn trên cơ thể trong một thời gian rất ngắn và hiếm khi gây ra các phản ứng bất lợi đáng kể. Song, nước hoa và các thành phần khác có thể gây kích ứng da và phản ứng dị ứng. Kem dưỡng ẩm làm tăng tính hút ẩm của da.Tuy nhiên, nồng độ cao của các chất này có thể gây kích ứng và tróc da. Các chất làm sáng/làm mờ da, như hydroquinone.

(HQ) là một trong các chất được quy định rộng rãi nhất, tuy nhiên theo báo cáo về việc gây đột biến tiềm ẩn và đồng bộ, có sự thúc đẩy việc tìm các chất thảo dược và dược phẩm thay thế, như kojic acid và axit azelaic (kem 20%). Hình xăm ëBlack hennaí là một vết hóa chất do p-phenylenediamine (PPD), ở dạng thuốc nhuộm tóc thương mại trộn vào hỗn hợp henna. Bổ sung thuốc nhuộm nhân tạo này làm ố da trong thời gian ngắn, một giờ hoặc ít hơn.

Phản ứng bất lợi với PPD có thể bao gồm cảm giác châm chích, cùng với phát ban hồng ban, sưng, phồng rộp và chảy nước bề mặt. Đã có một số tài liệu báo cáo về các phản ứng dị ứng ngay lập tức (và cả phản vệ) khi sử dụng thuốc nhuộm henna. Hầu hết các trường hợp bị hắt hơi, sổ mũi, ho và khó thở thay vì phản ứng da. Các ảnh hưởng bất lợi đối với các tác nhân sàng lọc ánh nắng mặt trời có thể dẫn đến các phản ứng kích ứng, dị ứng, quang độc tính hoặc quang điện và không chỉ gây ra bởi các thành phần chính mà còn bởi các chất phụ gia như nước hoa và chất ổn định. Benzophenones có lẽ là chất nhạy cảm phổ biến nhất, trong khi dibenzoylmethanes, axit para-aminobenzoic (PABA) và cinnamate có thể gây viêm da do quang hóa.

Các phản ứng dị ứng liên quan đến chất khử mùi/chất chống mồ hôi và nước hoa thường được gây ra bởi hương thơm hoặc các thành phần khác.Hương thơm có thể xâm nhập vào cơ thể qua phổi, đường thở, da, đường tiêu hóa và qua đường từ mũi trực tiếp đến não và có thể gây đau đầu, kích thích mắt, mũi và cổ họng, chóng mặt, mệt mỏi, giảm trí nhớ và các triệu chứng khác. Hương thơm là nguyên nhân số một của phản ứng dị ứng da với mỹ phẩm. Có đến 15% dân số nói chung có thể thấy nước hoa là chất gây kích thích đường thở thấp hơn và có đến 10% dân số nói chung có thể bị dị ứng da với nước hoa. Hương thơm trong không khí có thể gây viêm da tiếp xúc trong không khí. Coumarin, methyl eugenol và các chất khác bị nghi là chất gây ung thư. Một số phthalate bị nghi ngờ gây rối loạn nội tiết tố. Dầu gội và dầu xả chỉ có tiếp xúc thời gian ngắn với da và không phải là nguyên nhân phổ biến gây kích ứng da hoặc viêm da tiếp xúc dị ứng. Tuy nhiên, có thể gây kích ứng mắt. Các chất nhạy cảm có thể có trong dầu gội đầu bao gồm formalin, paraben, hexachlorophene, triclosan và nước hoa. Kết quả gây rụng tóc, xơ tóc là phổ biến nhất từ việc gội đầu. Duỗi tóc (thư giãn) với dầu ép và lược kim loại nóng hoặc kẹp tròn có thể liên quan đến gãy chân tóc và rụng tóc. Kỹ thuật tẩy lông có thể giải thích một phần cho các phản ứng dị ứng và quang hóa. Các ảnh hưởng bất lợi của việc cạo râu bao gồm kích ứng da, vết xước trên da, tóc mọc ngược, … Các hoạt chất trong thuốc tẩy tóc là dung dịch hydro peroxide oxy hóa melanin thành màu nhạt hơn. Những nhược điểm của tẩy trắng bao gồm kích ứng da, đổi màu da tạm thời, ngứa và tẩy trắng nổi bật chống lại làn da rám nắng hoặc tối màu tự nhiên. Ammonium persulfate có thể gây ra phản ứng tiếp xúc dị ứng loại I và IV.

Ngoài ra, đã có báo cáo về nổi mề đay, hen suyễn, ngất, và sốc phản vệ với chất kích hoạt lưu huỳnh. Khoảng 12% phản ứng thẩm mỹ xảy ra trên mí mắt, chủ yếu là do bóng mắt. Viêm da tiếp xúc dị ứng là phổ biến. Mascara là mỹ phẩm mắt được sử dụng phổ biến nhất. Tác dụng phụ đáng sợ nhất của mascara là nhiễm trùng, đặc biệt là nhiễm khuẩn pseudomonas aeruginosacorneal, có thể phá hủy vĩnh viễn thị lực, do nhiều lần tái sử dụng và bôi lại vào ống giữa các lần sử dụng. Kajal và surma chủ yếu là các hợp chất carbon, nhưng surma cũng chứa thủy ngân hoặc chì và có thể gây nguy cơ cho các vấn đề sức khỏe nghiêm trọng. Sự đổi màu của tấm móng và viêm da tiếp xúc dị ứng là mối quan tâm lớn về da liễu do sử dụng sơn móng tay.

An toàn của an toàn sản phẩm mỹ phẩm

Các phản ứng bất lợi có thể xảy ra với một trong những thành phần chính của công thức mỹ phẩm hoặc nhiễm bẩn, hoặc thực hiện quy trình lỗi. Chất bảo quản là nguyên nhân phổ biến thứ hai của phản ứng da, bên cạnh nước hoa. Hầu hết các phản ứng là kích thích hơn là dị ứng theo tự nhiên.Trong hầu hết các trường hợp, chỉ là nhẹ hoặc thoáng qua như châm chích, nhức nhối, và nổi mề đay. Trong một số ít trường hợp, các phản ứng có thể nghiêm trọng hơn như đỏ, phù, khô và đóng vảy. Các tác dụng phụ khác nhau có thể xảy ra ở dạng độc cấp tính, hấp thụ qua da, kích ứng da, kích ứng mắt, mẫn cảm và nhạy cảm da, nhiễm độc cận lâm sàng, gây đột biến/nhiễm độc gen và quang độc tính/quang hóa.

Đánh giá an toàn của một sản phẩm mỹ phẩm

Đánh giá an toàn của một sản phẩm mỹ phẩm rõ ràng phụ thuộc vào cách sử dụng, vì nó xác định lượng chất có thểăn, hít hoặc hấp thụ qua da hoặc màng nhầy. Nồng độ của các thành phần cũng rất quan trọng. Nồng độ quá cao dẫn đến phản ứng dương tính giảvì tác dụng kích thích của chúng, nồng độ quá thấp tạo ra kết quả âm tính giả, thậm chí có thể làm nhạy cảm bệnh nhân.Hầu hết các sản phẩm mỹ phẩm được thử nghiệm vá kín và vá mở. Thử nghiệm bản vá các thành phần riêng biệt thích hợp hơn. Nên thực hiện các thử nghiệm vá mở trước khi tiến hành các thử nghiệm vá kín, vì tác dụng của các chất gây kích ứng được tăng cường bởi sự tắc ngẽn. Dầu gội nên được pha loãng để tạo thành dung dịch nước 1ñ2% cho thử nghiệm vá kín và dung dịch nước 5% cho thử nghiệm vá mở. Thử nghiệm được thực hiện bằng cách đặt mỹ phẩm mắt gần mắt trong năm đêm liên tiếp.Sau đó, đánh giá da cho viêm da tiếp xúc dị ứng hoặc kích ứng. Sơn móng tay có thể được thử nghiệm như vậy. Thử nghiệm nhựa trong 10% xăng dầu. Mascara có thể được thử nghiệm vá mở và vá kín như vậy, nhưng cần cho chúng khô hoàn toàn trước khi thử nghiệm bản vá kín để tránh phản ứng kích thích từ phương tiện dễ bay hơi. Đối với tẩy sơn móng tay, chỉ nên thử nghiệm bản vá mở, ở nồng độ 10% chất tẩy sơn móng tay hòa tan trong dầu ô liu, nên thực hiện do nồng độ dung môi cao. Đối với tẩy da chết, có thể sử dụng thử nghiệm vá mở ở nồng độ dung dịch nước 2%. Quy trình thử nghiệm khác nhau bao gồm cả mô hình động vật in vivovà các mô hình in vitro được sử dụng để tìm ra mức độ an toàn của các sản phẩm mỹ phẩm, chẳng hạn như thử nghiệm mở hoặc đóng, thử nghiệm kích ứng da in vivo, thử nghiệm khả năng ăn mòn da (thử nghiệm kháng điện qua da chuột, thử nghiệm EPISKIN), thử nghiệm kích ứng mắt (xét nghiệm kích thích mắt in vivo và xét nghiệm kích thích mắt Draize), xét nghiệm gây đột biến gen/độc tính gen (xét nghiệm đột biến ngược vi khuẩn in vitro và xét nghiệm quang sai tế bào động vật có vú trong ống nghiệm) và xét nghiệm quangđộc tính độc tính/ quang hóa 3T3.

Phần quan trọng trong đổi mới mỹ phẩm và độc tính là mối quan tâm ngày càng tăng về đạo đức của việc thử nghiệm thành phẩm/thành phẩm cuối cùng trên động vật, đang dần được khuyến khích và xây dựng các phương pháp thay thế.

Các thử nghiệm vá và vá ảnh.

Thử nghiệm vá rất hữu ích trong việc biết loại phản ứng với một loại mỹ phẩm cụ thể, cho dù là gây kích ứng hay dị ứng. Ngoài ra, loạt thử nghiệm tiêu chuẩn có thể giúp xác định các chấtgây dị ứng. Mỹ phẩm có thể được phân loại theo cách sử dụng của chúng là mỹ phẩm chăm sóc da mặt như son môi thực hiện thử nghiệm vá. Loại thứ hai là mỹ phẩm làm sạchnhư dầu gội đầu. Chúng được sử dụng ở nồng độ 10%. Xà phòng và chất tẩy rửa được sử dụng ở nồng độ 1%. Để giải thích viêm da do quang hóa, thực hiện thử nghiệm photopatch và được coi là dương tính, nếu vị trí thử nghiệm cho thấy viêm da khi tiếp xúc với kháng nguyên và ánh sáng mặt trời. Kiểm tra thử nghiệm nước hoa Balsam của Peru, cinnamal, hỗn hợp nước hoa và colophony được công nhận về dị ứng nước hoa. Hỗn hợp nước hoa được bán trên thị trường dưới dạng thử TRUE (thử nghiệm sử dụng nhanh lớp mỏng) chứa tám thành phần: eugenol, isoeugenol, rêu sồi tuyệt đối, geraniol, aldehyd cinnamic, hydroxycitronellal, rượu cinnamicvà α-cinnamal. Hỗn hợp nước hoa phát hiện khoảng 86% phản ứng tích cực. Việc bổ sung dầu ylang-ylang, dầu narcissus, dầu gỗ đàn hương và balsam của Peru đã tăng tỷ lệ này lên 96%. Dị ứng với hương thơm cũng có thể được thử nghệm bằng cách sử dụng “Thử nghiệm ứng dụng mở lặp lại” (ROAT). Balsams, rượu cinnamic, cinnamaldehyd, axit benzoic và benzaldehyd có thể gây bệnh mề đay tiếp xúc không được phát hiện bằng thử nghiệm vá kín. Thử nghiệm ứng dụng mở /thử nghiệm sử dụng kích thích.

Trong thử nghiệm này, chất thử nghiệm mỹ phẩm nghi ngờ được áp dụng hai lần mỗi ngày trong hai tuần trên một diện tích khoảng 5cm2 trên bề mặt gấp khúc của cẳng tay gần phía trước cánh tay. Nếu sau một tuầnkhông có phát ban, sản phẩm được coi là an toàn cho cá nhân đó. Thử nghiệm này được áp dụng để sàng lọc dị ứng với mỹ phẩm bao gồm cả nước hoa và để xác nhận ý nghĩa lâm sàng của các phản ứng thử nghiệm vá dương tính. Thử nghiệm nhanh chóng sử dụng lớp mỏng thử TRUE là một thử nghiệm vá da dị ứng đáng tin cậy. Các bảng thử nghiệm chứa 23 chất hoặc hỗn hợp khác nhau, tất cả đều là nguyên nhân nổi bật của viêm da tiếp xúc và kiểm soát âm tính. Đôi khi, phân tích hóa học có thể cần thiết để xác định liệu một vật liệu có chứa chất gây dị ứng nghi ngờ hoặc để xác định các chất gây dị ứng mới chưa biết. Thử nghiệm bằng phương pháp thử nghiệm Dimethylgloxime là cách hữu ích và thiết thực để xác định dị ứng niken. Xác định các vật kim loại có chứa đủ niken để kích thích viêm da dị ứng ở những người dị ứng với niken. Thử nghiệm kích thích Fischer đề xuất loại bỏmột thói quen trong chẩn đoán phản ứng với mỹ phẩm. Dừng tất cả các mỹ phẩm ngoại trừ son môi, được phép nếu môi không có vấn đề.

Khi viêm da đã hết, loại mỹ phẩm tại một thời điểm được thử nghiệm/cho phép. Nếu một phản ứng xảy ra, mỹ phẩm được sử dụng gần đây nhất bị loại bỏ. Thử nghiệm an toàn FDA chỉ chấp nhận dữ liệu an toàn cho động vật. Thử nghiệm trên động vật được sử dụng rộng rãi nhất là xét nghiệm kích thích mắt ëDraize liên quan đến việc đặt những giọt chất gây nghi ngờ vào mắt của một con thỏ bạch tạng. Ghi nhận xét nghiệm dương tính nếu có bất kỳ vết đỏ, sưng hoặc vẩn đục nào trong mắt. Các tác nhân gây khó chịu và nhạy cảm. Khả năng gây kích ứng của hóa chất được đánh giá bằng: (1) thử nghiệm xà phòng hoặc sử dụng các thử nghiệm, và (2 ) thử nghiệm ërepeat insultí. Đối với khả năng kích thích, sử dụng kích thước bảng cá nhân12ñ20. Các bản vá (vật liệu) được áp dụng cho da (thường là mặt sau) với một lớp băng thường xuyên và cố định trong thời gian 48 giờ. Sau thời gian 48 giờ, miếng vá được loại bỏ và ghi lại sự xuất hiện của bất kỳ phản ứng nào. Các chất đang được thử nghiệm sau đó được áp dụng lại cho cùng một vị trí cho“Phản ứng Nigam” tiếp theo đối với mỹ phẩm và phương pháp thử nghiệmthời gian 48 giờ và quá trình này được lặp lại ba lần một tuần trong khoảng thời gian hai hoặc ba tuần. Đọc kết quả sau khi loại bỏ từng miếng vá

Đối với chất mẫn cảm tiềm ẩn, có một danh sách gồm ít nhất 100 chất đãđược tiến hành ở các địa điểm khác nhau. Nếu sau 48 giờ đưa ra kết quả vá lỗi, điều đó có nghĩa là các chất đó là chất mẫn cảm. Thử nghiệm các chất hóa học theo phương pháp kích thích mắt Draize (100 mg dung dịch đậm đặc) được nhỏ giọt vào mắt của sáu đến chín con thỏ bạch tạng bất động. Ghi lại tiến triển hư hại đối với mắt thỏ theo khoảng thời gian cụ thể trung bình là 72 giờ, đối với phương pháp thử nghiệm này đôi khi kéo dài 7-18 ngày. Phản ứng với các chất kích thích có thể bao gồm sưng mí mắt, viêm mống mắt, loét, xuất huyết (chảy máu) và mù lòa.

Thử nghiệm Draize được coi là phương pháp thử nghiệm thô bạo, không chính xác và không đáng tin cậy, vì nó cần theo dõi nghiêm ngặt và không phản ánh đầy đủ mức độ khó chịu ở người. Áp dụng thử nghiệm LLNA tại hạch bạch huyết (LLNA) để thử nghiệm hóa chất có khả năng tiếp xúc dị ứng. Các thử nghiệm này cho biết tính gây bệnh, trước đây đã tiến hành thử nghiệm trên tai thỏ, nhưng bây giờ thử nghiệm phổ biến về khả năng sinh sản ở người.

Thực hiện thử nghiệm tắc nghẽn trong một vài tuần trên lưng hoặc sườn của những người tình nguyện tham gia thử nghiệm. Vào cuối giai đoạn này, tiến hành sinh thiết đấm có đường kính 7 mm hoặc sinh thiết bề mặt da (sử dụng chất kết dính cynoacrylate). Sự xuất hiện của mụn trứng cá được đánh giá bằng kính hiển vi và ghi lại số lượng và kích thước. Áp dụng một số phương pháp nghiên cứu độc tính,phương pháp in vitro và in vivo. Phương pháp in vitro đã được xác nhận để sử dụng trong sàng lọc sơ bộ, sàng lọc độc tính quang, đánh giá sự hấp thụ qua da và nghiên cứu về tính đột biến/nhiễm độc gen.

Các nghiên cứu in vivo chủ yếu được áp dụng để thử nghiệm độc tính của một thành phần mỹ phẩm khi áp dụng đối với động vật bằng con đường phơi nhiễm (tại chỗ, bằng miệng hoặc bằng đường hô hấp) tương tự như phơi nhiễm ở người. Chúng cho phép xác định các mức hiệu ứng bất lợi không quan sát (NOAEL) và cả các tác dụng phụ khi tiếp xúc ở mức cao hơn.

 Nghiên cứu hấp thụ qua da được định nghĩa là sự chuyển động của một chất hóa học được áp dụng trên bề mặt da  thẩm thấu vào hệ thống tuần hoàn. Liều hấp thụ qua da là lượng hóa chất được phân phối có hệ thống. Nếu một chất đang thử nghiệm được phát hiện đã xuyên qua lớp sừng bảo vệ, thâm nhập vào các lớp sâu hơn của da thì nó được xem như là đã hấp thụ.

Để đánh giá in vitro về sự hấp thụ qua da của các thành phần mỹ phẩm, người ta sử dụng da người hoặc một phần chân bì của da lợn. Lựa chọn liều lượng cũng như thời gian tiếp xúc (phơi nhiễm) với da theo điều kiện sử dụng dự tính. Cân bằng khối lượng của liều áp dụng và xác định lượng tìm thấy theo từng lớp của da và trên bề mặt da. Lượng hấp thụ được biểu thị bằng gm/cm2 bề mặt da và tỷ lệ phần trăm của liều áp dụng. Sau đó, chúng được chuyển thành mg/kg trọng lượng cơ thể và do đó phục vụ cho việc đánh giá yếu tố an toàn.

Trong thử nghiệm in vitro, mặc dù áp dụng thử nghiệm ở người nhưng các thử nghiệm được đảm bảo an toàn. Tuy nhiên, nếu có thể thực hiện các thử nghiệm này trong phòng thử nghiệm, người ta thấy đó là phương pháp tiến bộ rõ ràng với chi phí rẻ hơn nhiều. Phương pháp thử nghiệm in vitro cho toàn bộ các tác dụng phụ có thể xảy ra.  Nhưng cho đến nay, chỉ có ba thử nghiệm in vitro được kiểm chứng về mặt khoa học: một về độc tính quang và hai về ăn mòn da. Các thử nghiệm này sử dụng những mảng da người và do đó được áp dụng trực tiếp trên cơ thể người. Thử nghiệm in vitro thay thế thử nghiệm thỏ Draize in vivo về độ ăn mòn da, bao gồm: (a) thử nghiệm khảo sát da chuột “TER “, (b) thử nghiệm corrositex, (c) thử nghiệm ăn mòn da 2TM ZK1350 và (d) thử nghiệm Episkin.

Thử nghiệm điện trở qua da in vitro (TER) đã được khuyến nghị để thử nghiệm tất cả các loại hóa chất. Các đĩa da được chuẩn bị từ những con chuột 28- 30 ngày ngày tuổi bị giết chết theo cách nhân đạo. Các chất thử nghiệm được áp dụng lên đến 24 giờ cho các bề mặt biểu bì của da. Các chất ăn mòn được xác định do khả năng làm mất đi tính toàn vẹn và chức năng bảo vệ của lớp sừng thông thường, được đo bằng mức giảm TER dưới mức ngưỡng. Trở kháng da được đo là TER bằng cách sử dụng cầu Wheatstone hiện tại có điện áp thấp, xen kẽ. Trong xét nghiệm ăn mòn TER, các phép đo được ghi lại theo điện trở, ở tần số 100 Hz và sử dụng các chuỗi giá trị.

Chất thử được coi là ăn mòn da: (a) nếu giá trị TER trung bình là ≤5 kΩ và da bị hư hại rõ ràng, hoặc (b) giá trị TER trung bình là ≤5 kΩ và da cho thấy khônghư hại rõ ràng, nhưng hàm lượng thuốc nhuộm đĩa trung bình thu được đồng thời lớn hơn hoặc bằng hàm lượng thuốc nhuộm đĩa trung bình theo kiểm soát dương tính HCl10M.

Thử nghiệm  Corrositex không đáp ứng tất cả các tiêu chí để được coi là thử nghiệm thay thế. Không thể đánh giá ăn mòn tiềm ẩn của khoảng 40% hóa chất thử nghiệm với corrositex. Thử nghiệm da có tỷ lệ đánh giá thấp không thể chấp nhận được (57%), mặc dù nó có độ đặc hiệu 100%.

Thử nghiệm Episkin nghĩa là thử nghiệm mô hình da người ba chiều bao gồm lớp biểu bì được tái tạo với lớp sừng bảo vệ. Bôi các chất thử nghiệm tại chỗ trên da trong thời gian 3, 60 và 240 phút, sau đó, đánh giá về tác dụng của chúng đối với khả năng tồn tại của tế bào bằng cách sử dụng thử nghiệm MTT. Thử nghiệm có thể phân biệt giữa các hóa chất ăn mòn và không ăn mòn đối với tất cả các loại hóa chất. Thử nghiệm về khả năng gây đột biến/nhiễm độc gen bao gồm xét nghiệm đột biến ngược vi khuẩn (hoặc thử nghiệm đột biến gen tế bào động vật có vú trong ống nghiệm) và xét nghiệm quang sai nhiễm sắc thể tế bào in vitromammalian.

Xét nghiệm đột biến ngược vi khuẩn phát hiện các hóa chất gây đột biến xuất hiện trong các chủng xét nghiệm và khôi phục khả năng chức năng của vi khuẩn để tổng hợp một axit amin thiết yếu.

Xét nghiệm đột biến ngược vi khuẩn sử dụng các chủng Salmonella typhimurium (S. typhimurium) và Escherichia coli (E. coli) cần axit amin để phát hiện điểm đột biến, liên quan đến việc thay thế, bổ sung hoặc xóa một hoặc một vài cặp bazơ DNA. Các chất thử được hòa tan hoặc lơ lửng trong dung môi hoặc phương tiện thích hợp và pha loãng thích hợp trước khi xử lý vi khuẩn. Âm tính đồng thời (dung môi hoặc phương tiện) và kiểm soát dương tính đặc hiệu của chủng, có và không có kích hoạt trao đổi chất, bao gồm trong mỗi xét nghiệm. Dữ liệu hiển thị dưới dạng số lượng khuẩn lạc hoàn nguyên trên mỗi đĩa.

Thử nghiệm quang sai nhiễm sắc thể tế bào động vật có vú trong ống nghiệm. Thử nghiệm này xác định các tác nhân gây ra hiện tượng quang sai nhiễm sắc thể cấu trúc trong các tế bào động vật có vú nuôi cấy. Nuôi cấy tế bào được tiếp xúc với chất thử có và không có hoạt hóa chuyển hóa.

Tại khoảng thời gian xác định trước khi tiếp xúc với nuôi cấy tế bào với chất thử nghiệm, chúng là các tế bào colchicine được xử lý, thu thập, nhuộm màu và metaphase được phân tích bằng kính hiển vi với sự hiện diện của nhiễm sắc thể và một chất xúc tác metaphase như colcemid. Các chất thử rắn phải được hòa tan hoặc lơ lửng trong dung môi hoặc phương tiện thích hợp trước khi xử lý tế bào. Các chất thử lỏng có thể được thêm trực tiếp vào các hệ thống thử nghiệm. Xử lý các tế bào tăng sinh bằng chất thử có sự hiện diện hoặc không hiện diện của một hệ thống kích hoạt trao đổi chất. Thời gian thu hoạch nuôi cấy (các tế bào tiếp xúc với chất thử) từ 3 đến 6 giờ và sau đó, các tế bào được phân tích bằng kính hiển vi cho quang sai nhiễm sắc thể. Các thử nghiệm về độ nhạy sáng, tiến hành hai loại thử nghiệm để kiểm tra khả năng nhạy cảm ánh sáng của chất thử nghiệm: (1) thử nghiệm về quang độc tính và (2) thử nghiệm đối với hiện tượng quang hóa.

Đối với tất cả các hóa chất hấp thụ tia cực tím, bao gồm cả thành phần mỹ phẩm, nên tiến hành thử nghiệm định kỳ về quang độc tính bằng một phương pháp in vitro có tên 3T3 thử nghiệm quang độc tính trung tính Red Uptake (3T3 NRU PT). Các mô hình động  vật chưa được xác nhận để thử nghiệm quang độc tính. Trong thử nghiệm độc tính hấp thụ ánh sáng màu đỏ trung tính 3T3 các hợp chất là phototoxic in vivo sau khi áp dụng và phân phối vào da toàn thân, cũng như các hợp chất hoạt động như chất quang hóa sau khi bôi ngoài da, có thể được xác định bằng phương pháp thử nghiệm này.

Nguyên tắc của phương pháp dựa trên so sánh độc tính tế bào của hóa chất khi thử nghiệm theo sự hiện diện và trong trường hợp không tiếp xúc với liều UVA/ánh sáng nhìn thấy không gây độc tế bào. Phương pháp này dựa trên quá trình quang độc tế bào, được quan sát thấy trong quần thể tế bào động vật có vú trong ống nghiệm. Thử nghiệm các hóa chất kiểm soát dương tính chlorpromazine đồng thời trong mỗi xét nghiệm. Sử dụng dòng tế bào nguyên bào sợi chuột, Balb/c 3T3, nhân bản. Biểu thị độc tính gây độc tế bào trong xét nghiệm này thông qua việc giảm nồng độ hấp thu của thuốc nhuộm, màu đỏ trung tính (NR) 24 giờ sau khi xử lý bằng hóa chất thử nghiệm và chiếu xạ. Nguồn sáng phát ra UVA và các vùng ánh sáng khả kiến, sử dụng cả hai vòng cung xenon và vòng cung halogen kim loại (pha tạp) để mô phỏng mặt trời. Theo nghiên cứu kiểm chứng đã xác định một liều 5 J/cm≤ (UVA) không gây độc tế bào đối với các tế bào Balb/c 3T3 và đủ mạnh để kích thích ngay cả các hóa chất phototoxic yếu.

Quy trình thử nghiệm diễn ra trong ba ngày. Ngày đầu tiên, chuẩn bị một huyền phù tế bào 1 x 105 tế bào/ml trong môi trường nuôi cấy và phân phối môi trường nuôi cấy 100 μL vào các lỗ ngoại vi của tấm microtiter nuôi cấy mô 96 lỗ. Ngày thứ hai, ủ các tế bào theo tám nồng độ hóa chất thử khác nhau trong bóng tối trong 60 phút (7,5% CO2, 37độ C). Ngày thứ ba, ghi lại việc đánh giá các tế bào được thực hiện dưới kính hiển vi tương phản pha và thay đổi hình thái của các tế bào do ảnh hưởng gây độc tế bào của hóa chất thử nghiệm. Kết quả được đánh giá là nồng độ của hóa chất thử nghiệm phản ánh sự ức chế 50% NRU của tế bào (EC50).

Thử nghiệm đã được chứng minh là mang lại khả năng dự đoán tuyệt vời về quang độc tính. Giá trị dự đoán của phương pháp này đối với hóa chất quang hóa tiềm ẩn ở người đã được chứng minh là từ 95 đến 100%. Thử nghiệm khả năng tương thích của các sản phẩm mỹ phẩm thành phẩm ở những người tình nguyện. Thử nghiệm trên động vật và các phương pháp thay thế bị hạn chế dự đoán đối với phơi nhiễm ở người, thử nghiệm khả năng tương thích xác nhận thành phẩm mỹ phẩm ở người có thể cần thiết về mặt khoa học và đạo đức.

Các sản phẩm mỹ phẩm thành phẩm thường được thử nghiệm trong các quần thể nhỏ để xác nhận khả năng tương thích của da và màng nhầy, để đánh giá khả năng chấp nhận mỹ phẩm. Hai loại thử nghiệm được áp dụng ở người tình nguyện để đánh giá khả năng tương thích da của các sản phẩm mỹ phẩm thành phẩm: (1) thử nghiệm khả năng tương thích: để xác nhận không gây hại khi lần đầu tiên sử dụng sản phẩm mỹ phẩm cho da người hoặc màng nhầy và (2) thử nghiệm khả năng chấp nhận: để xác nhận kỳ vọng đối với sản phẩm mỹ phẩm đang sử dụng.

 Ủy ban khoa học thuộc ủy ban châu Âu đã ban hành hướng dẫn sử dụng người tình nguyện trong thử nghiệm khả năng tương thích của các sản phẩm mỹ phẩm thành phẩm. Trẻ em không nên tham gia vào việc thử nghiệm tính tương thích của các sản phẩm mỹ phẩm.

Trong số các thử nghiệm được sử dụng thường xuyên nhất cho mỹ phẩm thành phẩm các sản phẩm là các thử nghiệm kích ứng da khi thử nghiệm vá tiếp xúc lặp đi lặp lại của con người, thử nghiệm sẹo rỗ và thử nghiệm xà phòng cho các chất tẩy rửa, và các phương pháp thử nghiệm mở hoặc các phương pháp khác được phát triển để mô phỏng các tình huống dự định sử dụng. Phản ứng kích thích ở người không phải là một biện pháp tuyệt đối liên quan đến xác định phạm vi phản ứng. Đối với các sản phẩm cụ thể, xác nhận có thể thực hiện thử nghiệm an toàn ở vùng xung quanh mắt. Có thể áp dụng các kỹ thuật xử lý sinh học không xâm lấn như hydrat hóa da, da khô, nếp nhăn, giảm sắc tố và đo lường mất nước trasepidermal (TEWL) trong đánh giá an toàn để định lượng và đánh giá các kết quả, nhằm đo lường ngay cả các triệu chứng cận lâm sàng. Các phương pháp trước đây để thử nghiệm khả năng tương thích da của mỹ phẩm màu đã bị hạn chế do khả năng phát hiện phản ứng ban đỏ (đỏ) ở các sản phẩm không trong suốt. Gần đây, một phương pháp quang phổ mới để định lượng màu đỏ của da người trong mỹ phẩm màu vivobelow (ví dụ: nhuộm tóc, son môi, trang điểm) đã được phát triển bằng máy đo quang phổ. Khả năng tương thích da của các sản phẩm mỹ phẩm không chuyển hóa được xác định bằng cách phát hiện ra một dải trong vùng phổ hồng ngoại gần. Hiện tượng mẫn cảm thường xảy ra trong quá trình đánh giá chủ quan các sản phẩm tiêu dùng và rất khó đo lường đúng cách theo khách quan.

Trước đây, kỹ thuật đánh giá cảm xúc khách quan (OEA) dựa trên đánh giá các phản ứng và thông số sinh lý tâm lý đã được chứng minh là rất phù hợp để xác định phản ứng của người tiêu dùng. Theo nghiên cứu gần đây, các hiệu ứng giao thoa giữa màu sắc và hương thơm thông qua OEA đã được đánh giá và người ta thấy rằng OEA có thể được áp dụng thành công cho các kích thích yếu như màu sắc, hương thơm và có sự khác biệt và không khớp với sự kích hoạt và hiệu ứng cảm xúc trên tình nguyện viên. Sự phân tách rất tinh tế của các kích thích cho thấy sự phụ thuộc lẫn nhau giữa màu sắc và hương thơm.

Dogra, Minocha và Kaur quan sát tỷ lệ viêm da dị ứng tiếp xúc là 3,3% với nhiều loại mỹ phẩm được bệnh nhân sử dụng. Loại phản ứng bất lợi phổ biến nhất đối với mỹ phẩm gặp ở bệnh nhân bị viêm da dị ứng tiếp xúc chủ yếu do thuốc nhuộm tóc, kem cạo râu và son môi chiếm 59,2%. Trong đó, thuốc nhuộm tóc và son môi gây viêm da dị ứng 35%. Các phản ứng ít phổ biến khác là viêm da kích ứng tiếp xúc, tăng sắc tố, giảm sắc tố, nổi mề đay, mụn trứng cá, gãy tóc và gãy móng. Trong một số trường hợp cho thấy mẫn cảm với các loại mỹ phẩm khác nhau và thành phần của chúng. PPD được phát hiện là chất mẫn cảm rất mạnh và là chất gây dị ứng tiếp xúc phổ biến trong thuốc nhuộm tóc, từ 35- 42% trường hợp. Nguyên nhân gây viêm da dị ứng tiếp xúc như kem cạo râu với hỗn hợp isopropyl myristate, xạ hương và nước hoa khác nhau, vv…

 Các loại kem sau cạo râu chủ yếu chứa cồn, nhôm chlorohydroxide, tinh dầu bạc hà, long não và glycerine. Viêm da tiếp xúc với các chế phẩm cạo râu chủ yếu là do các loại kem sau cạo râu và nước hoa. Thử nghiệm vá với kem cạo râu được thực hiện với thành phẩm hoặc với các thành phần riêng lẻ. Kính áp tròng được sử dụng rộng rãi cho cả mục đích thẩm mỹ và trị liệu. Fernandez đã nhấn mạnh các biến chứng khác nhau như nhiễm trùng do vi khuẩn và nấm,tổn thương biểu mô, propria và thậm chí cả nội mạc, đã có các cuộc thảo luận về các phương pháp khử trùng tốt hơn và phù hợp hơn để giảm các biến chứng. Người ta cũng đề xuất, vật liệu được sử dụng để sản xuất kính áp tròng nên có khả năng chống nhiễm trùng, dễ làm sạch và thấm oxy tốt. Hans và cộng sự đã đánh giá quang độc tính tiềm ẩn của các sản phẩm mỹ phẩm và tìm thấy một số loại son môi và kem bôi mặt tạo ra các loại phản ứng oxy (ROS), tán huyết và gây ra peroxid hóa lipid trong hồng cầu của con người (in vitro) khi tiếp xúc với ánh sáng mặt trời. Các loại son môi và kem thử nghiệm cho thấy sự hấp thụ trong phạm vi UV/nhìn thấy được. Nghiên cứu đã chứng minh sự tương tác của các sản phẩm mỹ phẩm và ánh sáng mặt trời và cho rằng nên tránh tiếp xúc với ánh sáng mặt trời sau khi sử dụng mỹ phẩm nhạy cảm ánh sáng. Bhargava và Mathew gần đây đã báo cáo một trường hợp ngộ độc thuốc nhuộm tóc, chủ yếu là do độc tính kết hợp của natri EDTA và PPD. Chanchal và Swarnalata đã mô tả các phương pháp mới lạ khác nhau trong mỹ phẩm thảo dược có thể cải thiện cả chất lượng thẩm mỹ và hiệu suất của một sản phẩm mỹ phẩm. Về mặt này, các phương pháp nghiên cứu và thảo luận bao gồm liposome, phytosome, transferosome, nanoemulsions, hạt nano, microemulsions, nanocstall, và cubosome. Dogra và Dua nhấn mạnh vấn đề chính trong viêm da thẩm mỹ là xác định chất gây dị ứng vì số lượng tác nhân mà bệnh nhân sử dụng.

Ngoài ra, ở Ấn Độ, không có quy định liên quan đến việc dán nhãn lên mỹ phẩm như ở phương Tây. Vì vậy, không có thông tin rõ ràng về các thành phần hiện có. Tại Ấn Độ, Đạo luật Mỹ phẩm chủ yếu nhằm mục đích điều chỉnh việc nhập khẩu, sản xuất, phân phối và bán thuốc và mỹ phẩm. Chính phủ hoặc tiểu bang có quyền đưa ra các quy tắc và chỉ định thanh tra để kiểm soát hoặc kiểm tra bất kỳ loại thuốc hoặc mỹ phẩm nào về tiêu chuẩn và an toàn có thể được thử nghiệm trong phòng thử nghiệm thuốc trung ương hoặc tiểu bang. Chính phủ có thể cấm sản xuất, nhập khẩu hoặc bán bất kỳ loại thuốc hoặc mỹ phẩm nào. Vi phạm pháp luật thì người quản lý doanh nghiệp hoặc chủ sở hữu phải chịu trách nhiệm hình phạt cho một thời hạn có thể kéo dài đến 3- 10 năm và cũng sẽ chịu trách nhiệm phạt tiền có thể là 500 hoặc 10.000 rupee hoặc với cả hai. Thuốc và quy tắc mỹ phẩm 1995 chứa danh mục các loại thuốc mà nhà sản xuất, nhà nhập khẩu và nhà xuất khẩu yêu cầu phải có giấy phép.

Kết luận

Mặc dù, các sản phẩm mỹ phẩm hiếm khi liên quan đến các mối nguy hiểm nghiêm trọng đối với sức khỏe, nhưng điều đó không có nghĩa là mỹ phẩm luôn an toàn khi sử dụng, đặc biệt là liên quan đến ảnh hưởng lâu dài có thể, vì các sản phẩm có thể được sử dụng rộng rãi trong hầu hết đời người. Mỹ phẩm và các sản phẩm chăm sóc cá nhân có thể chứa các thành phần mà độ an toàn không rõ ràng hoặc gây ra rủi ro cho sức khỏe. Thử nghiệm các sản phẩm mỹ phẩm là tự nguyện và được kiểm soát bởi các nhà sản xuất. Nhiều loại mỹ phẩm, chủ yếu là thuốc nhuộm tóc và dầu gội đầu có thể chứa các thành phần được phân loại là chất gây ung thư ở người đã biết hoặc có thể xảy ra. Hơn nữa, nhiều loại trong số đó cũng có thể chứa chất tăng sự thâm nhập qua da. Có ít cuộc nghiên cứu để ghi nhận các rủi ro về an toàn hoặc sức khỏe của phơi nhiễm lặp lại liều thấp đối với các hỗn hợp hóa học như các sản phẩm chăm sóc cá nhân.

Tài liệu tham khảo

1. Fischer AA. Cutaneous reactions to cosmetics. 2nd ed. Philadelphia: Lea and Febiger; 1973. p. 217-41.

2. Linda B, Sedlewicz BS. Cosmetic preservatives: Friend or foe? Skinmed 2005;4:8-100.

3. Foley P, Nixon R, Marks R. Frowen K, Thompson S. Thefrequency of reactions to sunscreens: Results of a longitudinal population based study on the regular use of sunscreen in Australia. Br J Dermatol 1993;128:512-8.

4. de Groot AC. Labelling cosmetics with their ingredients. Br Med J 1990;300:1636-8.

5. De Groot AC, Beverdam EG, Tjong Ayong Ch, Coenraads PJ, Nater JP. The role of contact allergy in the spectum of adverse effects caused by cosmetics and toiletries. Arch Dermatol 1988;124:1525-9.

6. Grief M, Maibach HI. Cosmetic ingredient labelling. Contact Dermatitis 1977;3:94-7.

7. Nigam PK, Saxena AK. Allergic contact dermatitis from henna. Contact Dermatitis 1988;l8:55-

8. Johansen JD, Rastogi SC, Menne T.Johansen JD. Threshold responses in cinnamic-aldehyde-sensitive subjects: Results and methodological aspects. Contact Dermatitis 1996;34:165-71.

9. Schafer T, Bohler E, Ruhdorfer S, Weigl L, Wessner D, Filipiak B, et al. Epidemiology of contact allergy in adults. Allergy 2001;56:1192-6.

10. de Groot AC, Frosch PJ. Adverse reactions to fragrances: A clinical review. Contact Dermatitis 1997;36:57-86…..

Yhocvn.net/Theo Tạp chí Thử nghiệm Ngày nay